sábado, 17 de febrero de 2007

Cuantificación de proteínas

PRACTICA DE BIOQUIMICA II: CUANTIFICACION DE PROTEINAS

INTEGRANTES:

APONTES JAIR

PEREZ JAVIER

RIVERA ALEXANDER

PROFESOR:

RAMON LOZADA DEVIA

Químico M.sc

UNIVERSIDAD DE SUCRE

FACULTAD DE EDUCACION Y CIENCIAS

DEPARTAMENTO DE BIOLOGIA

PROGRAMA DE BIOLOGIA

LABORATORIO DE BIOQUIMICA II

SINCELEJO – SUCRE

MARCO TEORICO

Las proteínas son macromoléculas por lo cual poseen pesos moleculares elevados. Todas producen por hidrólisis µ -aminoácidos.

Las proteínas pueden clasificarse, basándose en su:

· Composición

· Conformación

Según su composición, las proteínas se clasifican en:

· Proteínas Simples: Son aquellas que por hidrólisis, producen solamente µ -aminoácidos.

· Proteínas Conjugadas: Son aquellas que por hidrólisis, producen µ -amino-ácidos y además una serie de compuestos orgánicos e inorgánicos llamados: Grupo Prostético.

Las proteínas conjugadas pueden clasificarse de acuerdo a su grupo prostético:

· Nucleoproteínas (Ac. Nucleico)

· Metaloproteínas (Metal)

· Fosfoproteínas (Fosfato)

· Glucoproteínas (Glucosa)

Según su conformación, las proteínas pueden clasificarse en:

· Proteínas Fibrosas: Son aquellas que se hayan constituidas por cadenas polipeptídicas, ordenadas de modo paralelo a lo largo de un eje formando estructuras compactas (fibras o láminas).

· Proteínas Globulares: Están constituidas por cadenas polipeptídicas plegadas estrechamente, de modo que adoptan formas esféricas o globulares compactas.

La sangre es un humor circulatorio conectivo especializado, compuesto por plasma sanguíneo y los llamados elementos figurados o elementos formes, el segundo componente celular de la sangre: los glóbulos rojos, los glóbulos blancos y las plaquetas. En términos médicos se relaciona a la sangre como hemo o hemato, por el término del idioma griego haima que se utiliza para la sangre.

La función principal de la sangre es proveer nutrientes (oxígeno, glucosa), elementos constituyentes del tejido y eliminar desperdicios (como dióxido de carbono y ácido láctico). La sangre también permite que células y distintas sustancias (aminoácidos, lípidos, hormonas) sean transportados entre tejidos y órganos. Los problemas en la composición de la sangre o problemas de circulación, pueden acarrear una disfunción del tejido.

La sangre circula alrededor de los pulmones y el cuerpo a través de los vasos sanguíneos, fenómeno provocado por la acción de bombeo del corazón.

La sangre está compuesta por muchos tipos de corpúsculos; estos elementos constituyen alrededor de un 45% de la sangre, lo que se conoce con el nombre de hematocrito. El otro 55% es plasma sanguíneo, un fluido amarillento que conforma el medio líquido de la sangre, compuesto por agua y sales. El pH normal de la sangre arterial humana es aproximadamente de 7,40. La sangre es alrededor del 7% del peso del cuerpo humano promedio [1] y, por lo tanto, un adulto tiene un volumen de sangre de aproximadamente cinco litros, de los cuales 2,7-3 litros son plasma. La sumatoria de las superficies de todos los eritrocitos en la anatomía humana sería alrededor de 2000 veces mayor que la superficie exterior del cuerpo humano.

Los glóbulos rojos se conocen también como hematíes y se forman en la médula ósea roja. Los glóbulos blancos pueden ser polimorfonucleares (eosinófilos, basófilos y neutrófilos) o mononucleares como los monocitos y los linfocitos (T, B); también se originan en la médula ósea roja. Las plaquetas (trombocitos) son células anucleadas que sirven para taponar las lesiones que pudieran afectar a los vasos sanguíneos y se forman en la médula ósea a partir de la fragmentación de una célula gigante llamada megacariocito.

El plasma sanguíneo es esencialmente una solución acuosa conteniendo 96% agua, 4% proteínas y algunos rastros de otros materiales. El plasma sanguíneo es la porción líquida de la sangre en la que están inmersos los elementos formes. Es salado y de color amarillento. Además de transportar las células de la sangre, también lleva los alimentos y las sustancias de desecho recogidas de las células. El plasma origina el suero sanguíneo cuando se coagula la sangre.


RESULTADOS

MUESTRA

ABSORBANCIA

Proteínas totales

0.167

Globulinas

0.1581

Ecuación de Practica anterior (curva de calibración):

y= 0,0023x + 0,6724

Donde y = Absorbancia

x = Concentración de proteínas

b= tiende a cero

Entonces, remplazando datos obtenemos los siguientes valores:

y= 0,0023x + 0,6724

x = y / 0,0023

Proteínas totales:

X = 0.167 / 0,0023 = 72,60

X = [ ] x 5 x 20 x 2 = Pt

X= 72,60 x 5 x 20 x 2 = 14520

Pt = 14520 mg/ml

14520 mg/ml x 1gr x 1000ml x 1lt = 1452 gr/dl

1000mg 1lt 10dl

Pt = 1452 gr/dl

Globulinas:

X = 0.1581 / 0,0023 = 68,73

X = [ ] x 5 x 20 x 2 = Pt

X= 68,73 x 5 x 2 x 2 = 1374,6

G = 1374,6 mg/ml

1374,6 mg/ml x 1gr x 1000ml x 1lt = 137,46 gr/dt

1000mg 1lt 10dl

G = 137,46 gr/dl

% de albúmina = Pt – G

% de albúmina = 1452 gr/dl - 137,46 gr/dl = 1314.54 gr/dl

Proteínas

[ ] g/dl

Proteínas totales

1452

Globulinas

137,46

Albúmina

1314.54


ANALISIS DE RESULTADOS

El plasma es una mezcla de proteínas, aminoácidos, glúcidos, lípidos, sales, hormonas, enzimas, anticuerpos, urea, gases en disolución y sustancias inorgánicas como sodio, potasio, cloruro de calcio, carbonato y bicarbonato. El agua constituye el 91% y las proteínas el 8%. Estas proteínas son: fibrógeno (para la coagulación), globulinas (regulan el contenido del agua en la célula, forman anticuerpos contra enfermedades infecciosas), albúminas (ejercen presión osmótica para distribuir el agua entre el plasma y los líquidos del cuerpo) y lipoproteínas (amortiguan los cambios de pH de la sangre y de las células y hacen que la sangre sea más viscosa que el agua). Otras proteínas plasmáticas importantes actúan como transportadores hasta los tejidos de nutrientes esenciales como el cobre, el hierro, otros metales y diversas hormonas.

La albúmina es una proteína que se encuentra en gran abundancia en el plasma sanguíneo, siendo la principal proteína de la sangre. Es sintetizada en el hígado.

La concentración normal de albúmina en la sangre humana oscila entre 3,5 y 5,0 gramos por litro, y supone alrededor del 50% de la proteína plasmática. El resto de proteínas presentes en el plasma se llaman en conjunto globulinas. La albúmina es fundamental para el mantenimiento de la presión oncótica, necesaria para la distribución correcta de los líquidos corporales entre el compartimiento intravascular y el extravascular, localizado entre los tejidos. La albúmina tiene carga eléctrica negativa. La membrana basal del glomérulo renal, también está cargada negativamente, lo que impide la filtración glomerular de la albúmina a la orina.

En nuestro caso, el porcentaje de albúmina presente en la sangre dio un valor muy grande, de 131,45 gramos por litro, este error es en gran parte a que la ecuación y= 0,0023x + 0,6724 de la practica de curva de calibración esta mal diseñada, en esa practica hubo problemas en la calibración del fotocolorimetro, por tanto al usarse dicha ecuación en nuestro experimento, esta iba a arrojar datos imprecisos y erróneos.

CONCLUSIONES

Ø La albúmina es una proteína que se encuentra en gran abundancia en el plasma sanguíneo, siendo la principal proteína de la sangre.

Ø La concentración normal de albúmina en la sangre humana oscila entre 3,5 y 5,0 gramos por litro, y supone alrededor del 50% de la proteína plasmática. El resto de proteínas presentes en el plasma se llaman en conjunto globulinas.

Ø La albúmina es fundamental para el mantenimiento de la presión oncótica, necesaria para la distribución correcta de los líquidos corporales entre el compartimiento intravascular y el extravascular.

Ø El plasma origina el suero sanguíneo cuando se coagula la sangre.